肌钙卵白I的生化特点及其影响测定的因素
宣布于：2011-09-19
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随着研究和应用的生长，心肌肌钙卵白（cTn）[包括心肌肌钙卵白I（cTnI）和心肌肌钙卵白T（cTnT）]已成为临床诊断心肌损伤简直定标记物 。由于仅一家生产厂商拥有cTnT生产专利，因此人们对cTnI的生产应用兴趣大增 。现在FDA至少已批准8家生产厂商的共16种cTnI检测试剂 。在临床应用中发明，这些cTnI检测试剂的测定值之间保存着差别，差别的cTnI 剖析要领对统一份标本的检测值最大可相差30余倍，这使得种种要领的参考规模、剖析滋扰、剖析变异、诊断窗口期以及诊断和预后的临界值等泛起差别水平的差别，给临床应用和评价带来一定困扰 。相识cTn特殊是cTnI的系列化特殊和种种剖析测定试剂的特征，将有助于临床上准确使用这些要领检测和评价心肌缺血损伤 。
??? 一、心肌肌钙卵白细胞内结构和漫衍
??? 1.1 心肌肌钙卵白结构结构 cTn由三种亚基组成，加入调理肌肉缩短活动 。其中的肌钙卵白C（TnC）是Ca2+团结亚基，分子量18kDa，等电点4.1；cTnI为抑制亚基，分子量23kDa，等电点9.87；cTnT为原肌球卵白团结亚基，分子量34kDa，等电点5.1 。
??? 在Ca2+保存的情形下，TnC与Ca2+团结后构型爆发转变，与cTnI的团结增强（Ka 约为1.5×10-8 M-1）；TnT与TnC – cTnI团结，但较TnC – cTnI之间的团结弱 。反之，Ca2+浓度低或TnC未与Ca2+结适时，TnC和cTnI之间的团结较量松散 。cTnI-cTnT的团结相对较弱( Ka 约为1.5×10-5 M-1) 。
??? 1.2 心肌肌钙卵白的组织含量 在心肌内cTnI的含量约莫为5mg/g湿重组织，cTnT的含量大致为10.8mg/g湿重组织（相比之下，CK-MB仅1.4mg/g湿重组织；cTn主要团结于心肌肌纤维中，少量（cTnI的2.8% ～ 4.1%；cTnT的6% ～ 8%）在细胞浆中以游离形式保存 。这与心肌细胞缺血损伤后的释放方法亲近有关 。
??? 1.3 释放形式 心肌细胞损伤后，游离cTnT较早释放形成第一个峰，随后团结于肌纤维中的cTnT逐渐释放而泛起第二个峰；由于细胞液中的含量较少，cTnI释放通常只有一个峰 。cTn一样平常在心肌损伤后5 ～ 8h外周血中泛起增高，最高值在12 ～ 24h,增高可一连7 ～ 10天（cTnI）或10 ～ 14天（cTnT） 。
??? 1.4 外周血中保存形式 外周血中的cTn事实是以复合物照旧游离形式保存，曾有过许多效果差别的研究报道 。现在多以为，cTn释放主要是以TnC﹣cTnI﹣cTnT复合物形式，随后降解 。外周血中的cTnI既有游离形式，又有差别复合物的形式（cTnI﹣TnC、cTnI﹣cTnT以及cTnT﹣cTnI﹣TnC） 。在AMI病人中以cTnI﹣TnC复合物形式居大都（90%以上），cTnI﹣cTnT复合物仅在不到50%病人的血中被发明，并且其中的cTnI仅占部cTnI的5%以下，因此检测主要性远不如cTnI﹣TnC复合物；其他形式的cTnI较少；cTnT游离形式较多见 。
??? 1.5 抗体识别位点（抗原决议簇） 差别亚基复合物的形式使得一种抗cTnI的抗体不可识别另一结构形式cTnI的抗原决议簇 。有的单克隆cTnI的抗体识别游离形式cTnI的能力较强；有些则主要以识别TnC﹣cTnI复合物形式为主 。这使得接纳差别抗体的种种试剂检测统一标本时泛起检测效果差别的征象 。
??? 二、心肌肌钙卵白I的结构稳固性
??? 体外实验研究生长，AMI的心肌坏死组织作育3h后，cTnI的卵白质一级结构、二级结构和三级结构都泛起了水平不等的转变 。
??? 2.1 卵白水解酶作用 研究发明，AMI后若血运未重新建设，心肌细胞在30～60min内坏死，坏死细胞的溶酶体可释放多种卵白水解酶 。cTnI较不稳固，易受卵白水解酶作用，在体外实验中发明迅速降解，但其差别部分受影响的水平有差别 。cTnI的中心区域（第28位和第110位氨基酸）稳固生显着较高（可能是受TnC的�；ぷ饔茫�；氨基病和羧基端则对卵白水解酶作用敏感 。氨基端水解后降解形成-14kDa的片断；羧基端则降解形成-18kDa的片断 。因此，欲提高检测敏感性和可重复性，抗体的识别位点**位于cTnI的中心区域 。
??? 2.2 卵白激酶A磷酸化 cTnI的第22位和第23位的丝氨酸易受卵白激酶A作用爆发磷酸化反应，使cTnI形成四种形式：一种未磷酸化、两种单磷酸化和一种双磷酸化结构 。研究发明，病人体内磷酸化形式的cTnI占相当数目 。磷酸化可改变cTnI的分子结构形式和抗原性，从而影响某些抗体的识别 。
??? 2.3 氧化还真相式 cTnI的第79位和第96位是半胱氨酸，容易爆发氧化或还原反应 。这种氧化或还原反应了可影响cTnI的分子结构形式和抗原性，从而影响某些抗体的识别能力 。
??? 三、测定校准品
??? 各生产厂商的cTnI校准品内含的cTnI结构形式或含量各不相同，使得测定效果截然不同 。甚至使用统一份标定cTnI值的人血清举行校准也未能完全消除差别测定系统之间测定值的差别 。因此，有人提议**接纳从人心组织提取的cTnI﹣cTnT﹣CTnC复合物作为校准品 。
??? 四、抗凝剂
为缩短检测周转时间（TAT），许多检测要领要求接纳血浆或全血，以阻止疏散血清所需的时间 。这需要合理选择适当的抗凝物 。
??? 4.1 EDTA EDTA是Ca2+螯合剂，可促使cTnI﹣TnC复合物的解离，使游离型cTnI增添，从而影响测定值的真实性 。因此，有些专家以为**阻止使用 。
??? 4.2 肝素 cTnI带有较多正电荷（pI 9.87）,易于和带有负电荷的基团形成复合物 。肝素带有负电荷，与cTnI团结形成的复合物可影响抗原一抗体反应，进而引起cTnI检测值降低 。但在差别的cTnI检测试剂中，肝素的滋扰水平不等 。
??? 为使cTnI的测定越发准确，以便为临床提供越发科学、可靠的信息，许多临床化学家举行了大宗的深入研究探讨，并呼吁开展cTnI测定标准化事情 。为了使cTnI测定标准化顺遂举行，IFCC和AACC还划分建设了专门机构从事这方面事情 。必需熟悉到，cTnI的测定标准化事情将是十分难题的 。
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摘自《磨练医学在线》
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